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实验室常用采血方法的介绍

发布日期:2023-05-23       文章来源:Default Organization       作者:王方
  采血是动物实验的基本操作之一,通过采集动物的血液进行检测,从而更好的观察其生理生化的变化。我们以小鼠和大鼠为例,向大家介绍实验室内常用的四种采血方法:
1.尾静脉采血法
  将鼠放入固定器内,酒精棉球反复擦拭鼠尾,使鼠尾静脉充分充血。剪刀剪去鼠尾尖(小鼠1~2 mm,大鼠5~10 mm),血即可自尾尖流出,滴入备用试管或直接用吸管吸取。也可用手轻轻从尾根部向尾尖部挤几下,使血液流入备用的收集管内。也可交替切割尾静脉搏取血,用锋利的刀片在尾巴上切一小口,切破一段尾静脉,静脉血即可由伤口流出。取血后用干棉球或使用止血剂(如硝酸银、6%液体火棉胶)压迫止血。
  此方法操作简单,适用于需血量少的连续多次采血,如血糖或血常规的动态检测。但采血量较少,小鼠约0.1 mL,大鼠约0.3~0.5 mL,且按摩鼠尾有可能增加溶血的风险。

2.眼眶静脉丛采血法
  将鼠麻醉后侧卧在动物台上,左手拇指和食指压迫动物的颈部同时将皮肤向后拉(注意避免用力过度压迫气管),使眼球外突,眼眶后静脉丛充血。右手拿一毛细管(建议采用0.5*100 mm规格的毛细管,使用前可折成小段,每段约为3~4 cm),与鼠平面成30°~45°的夹角沿内眦插入内眼角,划入眼球后方,轻轻向眼底方向刺入。刺入深度小鼠约2~3 mm,大鼠约4~5 mm。当感到阻力时立即停止进针,转180°使斜面对着眼眶后界,即有血液留出。若不行,将针退出约0.1~0.5 mm,血液会通过毛细作用进入毛细管内。采血结束后,立即拔出采血管,松开左手,用干棉球压住眼眶止血。
  此方法左右眼可交替使用,采血量中等,小鼠约0.2~0.3 mL,大鼠约0.4~0.6 mL。虽可反复采血,但易损伤眼球,采血后至少需要10天的组织修复过程,血液中可能混有眼窝内的组织液和腺体分泌物,对血样要求高的研究应谨慎使用。
3. 颌下静脉采血法
  将鼠侧卧,固定头部,对采血部位消毒,采血部位位于头部下颌骨后方咬肌边缘颌下静脉丛血管处(大致在嘴角沿线与外眼角线相交处,会发现一个无毛的小点,有点像酒窝,基本位于嘴角远端稍低下巴线)。将针垂直扎入采血部位,穿刺时可以感觉到下颌骨,尽量避免刺穿下颌骨。拔出针头后血液流出,可使用毛细管收集也可直接滴入采血管内。为方便采血,可使小鼠头部低于心脏高度。采血结束后,立即用灭菌干棉球压迫止血。
  此方法是国际上最新、最简单快捷、最人道的采血方法,无需麻醉,采血时间短,对鼠损伤小,动物恢复快,符合3R原则,每次采血量约0.2~0.5 mL,适用于中等需血量的血液指标的连续监测。注意血液由下颌部被毛处流出,避免粘连毛发污染血液。
4. 心脏取血法
  将鼠麻醉后仰卧固定在动物台上,剪去胸前部位的被毛,用碘酒或酒精消毒,右手持注射器(小鼠采用4~5号针头,大鼠采用6~7号针头)在左侧第3~4肋间心搏最强处(一般位于两上肢连线下0.5 cm中线稍偏左)进针刺入心内,血液自动流入注射器时便可缓慢回抽,再转移至采血管内。也可麻醉后切开大小鼠胸腔,暴露心脏,将注射器直接刺入右心室抽取血液。
  此方法适用于需血量大的实验终末期的动物采血,抽血快,血液不易凝集,小鼠采血量约0.5~0.8 mL,大鼠采血量约1~1.5 mL。注意要迅速而直接的插入心脏,否则心脏将从针尖处滑脱;如第一次没刺准,不要在心脏周围乱探,以免损伤心肺;抽血时应缓慢而稳定地抽血,否则太多的真空反而使心脏塌陷血液不易流出。